齐齐哈尔地区脑卒中患者生物样本库的建立和质(2)

1.6存储样本的定期抽检

每年对样本进行抽样检测，按约1/500的比例随机抽取，通过微量核酸蛋白检测仪检测核酸的浓度和纯度，琼脂糖凝胶电泳检测DNA和RNA样本的完整性。

2　结果

2.1样本的收集

脑卒中生物样本库于2013年开始建立，现已初步形成标准化、规范化的样本采集、处理、保存流程及管理、质量控制体系，共收集血清、血浆样本各3008份，白细胞2253份，DNA、RNA样本各3770份。

2.2 DNA质量鉴定

所提取的基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳检测，结果如图1，DNA电泳条带清晰，完整性良好无降解现象。使用核酸蛋白检测仪检测，光密度OD260/OD280值为1.8～2.0，提示无RNA和蛋白污染。

图1　DNA琼脂糖凝胶电泳图

2.3 RNA质量鉴定

所提取的RNA样本经琼脂糖凝胶电泳检测，结果如图2，可见清晰的18S和28S两条带，且28S条带亮度约为18S条带亮度的2倍。使用核酸蛋白检测仪检测，光密度OD260/OD280值为1.7～2.0，提示RNA提取质量良好，无降解且纯度高。

图2　RNA琼脂糖凝胶电泳图

2.4样本储存质量鉴定

微量核酸蛋白检测仪和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示，所抽检的DNA和RNA样本未出现降解等现象，浓度及纯度与未冻存前相比无显著差异，样本保存质量良好（图3、图4）。

图3　DNA琼脂糖凝胶电泳图A.冻存前样本DNA电泳图；B.冻存后样本DNA电泳图

图4　RNA琼脂糖凝胶电泳图A.冻存前样本RNA电泳图；B.冻存后样本RNA电泳图

3　讨论

脑卒中是一组以脑组织缺血及出血性损伤为主要临床表现的脑血管病［6］，影响因素很多，因此对脑卒中患者的数据信息进行规范化管理十分重要。一个优秀的样本库信息化管理体系的建立能够带来重要的科研价值［7-8］。目前，国内已建起不同规模的脑卒中数据库，如新疆石河子市人民医院建立的新疆地区脑卒中数据库［9］、湖南湘潭市第二人民医院建立的湘潭地区脑卒中数据库［10］等。研究人员可利用数据库资源，探索并总结其发病的现状及特点，为脑卒中的预防和治疗提供可靠依据，这对规范和提高该地区脑血管病的整体诊治水平具有重要作用。近年来，随着分子生物学的快速发展，相关医学研究［11-13］显示，疾病的发生大多与基因相关。生物样本作为进一步基因水平研究及个体化诊疗（personalized medicine）的基础［14］，是不可再生的珍贵资源。目前，本院的脑卒中样本库已初步建立，样本库的操作规范、伦理程序、信息管理体系的建设及样本的存储程序等已基本成熟，从2013年开始，共收集血清、血浆样本各3008份，白细胞2253份，DNA、RNA样本各3770份，建立了标准化、高质量的脑卒中生物样本库，为脑卒中更深入的研究提供了基础。

高质量的生物样本是获得可靠研究数据的基础［15］，为新诊断指标的发现及新药的研发提供了保障，对人类疾病个体化预测、诊断、治疗的研究具有重要意义［16］。本院生物样本库制订了一套完整的样本质量管理体系，技术人员上岗前需经过严格的系统培训，从血液样本的采集到样本的运送、处理、保存及信息管理均能熟练掌握；定期进行规范操作培训和考评，确保每个环节都能得到有效的执行。血液样本采集后如不能马上处理，需先置于4℃冰箱内保存，在3～5 h内分离血清、血浆，否则会导致细胞结构变化和核酸蛋白降解。目前对血清、血浆等血液类样本没有特别理想的通用质量检验方法，整个流程严格的质量控制是主要的质量保证手段［17］。定期随机抽样及样本用户的质量信息反馈对于样本质控也具有重要意义［18］。抽样结果及反馈意见能及时发现问题，进而制订相应的纠正措施。如果是技术人员的操作问题，应重新进行规范操作培训；如果是流程方法问题，应及时进行优化改进，进一步保证样本质量。本研究结果显示，抽检样本的DNA条带完整清晰，无拖尾现象，提示DNA样本保存完好，无降解；RNA条带的28S、18S清晰可见，提示RNA完整性好，无明显降解；抽样检测结果证明本院脑卒中生物样本库DNA、RNA保存完好，可满足大部分实验要求，也证明根据本院的标准化操作流程，收集的样本质量可以得到保证。

文章来源：《齐齐哈尔大学学报（自然科学版）》 网址: http://www.qqhedxxb.cn/qikandaodu/2021/0519/616.html